盐泽螺旋藻藻蓝蛋白裂合酶CpcS的分子克隆及功能研究

作者：盛怡,李慧敏,伍贤军,杨红,朱咏莉,李萍萍

摘要：为研究盐泽螺旋藻(Spirulina subsalsa)藻蓝蛋白裂合酶CpcS的催化功能,首先通过PCR技术从S. subsalsa FACHB351基因组DNA中扩增藻蓝蛋白裂合酶的编码基因SscpcS,构建表达质粒pCDFDuet-SscpcS,然后再与脱辅基蛋白和色素合成酶表达质粒pETDuet-SscpcB-Ssho1::SspcyA共同转入大肠杆菌BL21(DE3),并经IPTG(Isopropyl β-D-Thiogalactoside,异丙基硫代半乳糖苷)诱导重组合成藻蓝蛋白。PCR产物测序表明SscpcS扩增成功;双酶切检测和SDS-PAGE电泳分析表明质粒pCDFDuet-SscpcS构建成功,且能表达目的蛋白。重组藻蓝蛋白PCB-CpcB细胞产物为深蓝色;纯化后的色素蛋白展现620 nm的最大吸收峰和646 nm的最大荧光发射峰;色素蛋白通过锌离子染色,在紫外线照射下展现明显荧光。该研究成功克隆源自盐泽螺旋藻的藻蓝蛋白裂合酶SsCpcS的编码基因,其表达产物SsCpcS能有效催化藻蓝蛋白的生物合成。此研究为S. subsalsa藻蓝蛋白的重组合成及抗氧化试剂的研制奠定基础,也为探明盐泽螺旋藻中CpcS的催化机理提供科学依据。

发文机构：南京林业大学生物与环境学院 南京林业大学江苏省南方现代林业协同创新中心

关键词：盐泽螺旋藻裂合酶藻蓝蛋白重组表达生物合成Spirulina subsalsalyasesphycocyaninrecombinant expressionbiosynthesis

分类号： Q71[生物学—分子生物学]