藏猪兴奋性氨基酸转运载体EAAC1基因的克隆与原核表达

作者：傅德智,孔祥峰,杨焕胜,褚武英,李铁军,印遇龙

摘要：兴奋性氨基酸转运载体EAACl是肠道内谷氨酸的主要载体。本研究根据人的基因编码区设计一对特异性引物，以藏猪空肠总RNA为模板，通过RT—PCR获得一长约1600bp的cDNA片段，T／A克隆后测序，并进行序列分析；将该基因片段连接到原核表达载体pET-32a（＋）中构建融合表达质粒，转化到EcoliBL21（DE3）中进行表达。测序结果显示，获得的cDNA全长为1575bp，编码524个氨基酸；EAACl分子量为57kD，等电点为5．34，GenBank登录号为GQ375513；该蛋白质具有3个N-糖基化位点、8个蛋白激酶c磷酸化位点和1个cAMP／cGMP依赖性蛋白激酶磷酸化位点，含有7个跨膜结构域和一个信号肽序列；SDS—PAGE电泳检测结果表明，表达蛋白质与预期蛋白质大小一致。上述结果为讲一步研究EAAC1的功能屉其调摔蕈窄了甚础．

发文机构：中国科学院亚热带农业生态研究所 亚热带农业生态过程重点实验室/湖南省畜禽健康养殖工程技术研究中心 中国科学院研究生院 长沙大学生物工程与环境科学系

关键词：藏猪兴奋性氨基酸转运载体序列分析原核表达Tibetan pigexcitatory amino acid carder 1sequence analysisprokaryotic expression

分类号： Q781[生物学—分子生物学]Q786[生物学—分子生物学]